T7 RNA聚合酶

作者 启辰生 发布于 2025-04-07
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产品说明

T7 RNA聚合酶,(T7 RNA Polymerase) 是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶,以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板,NTP为底物,合成与启动子下游的单链DNA或 双链DNA模板链互补的RNA。该酶由883个氨基酸组成,分子量为99kDa。

来源:T7 RNA 聚合酶纯化自携带T7 RNA 聚合酶表达载体的BL21大肠杆菌。


产品用途

  1. 合成单链RNA;
  2. 制备放射性标记RNA探针
  3. 合成siRNA前体
  4. 制备用于研究RNA结构、加工和催化的RNA

*使用帽结构类似物,制备帽化RNA

产品包装

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活性定义

在37℃、pH8.0的条件下,1小时内使1nmol的GMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位

保存体系

50%甘油,50 mM Tris-HCl,  pH 8.0, 100 mM NaCl, 10 mM DTT, 1 mM EDTA ,0.1% Triton X-100。

保存温度:-20℃,或-80℃长期保存

参考反应体系(100μl

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混匀后,37℃反应2~3小时。

注意事项 

  1. 在反应体系中可添加 RNase Inhibitor(终浓度为1U/μl),防止 RNase 污染。 
  2. 为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或 5′突出末端; 
  3. 缓冲液中的亚精胺与核酸结合可能形成不溶物,建议最后加入模板 DNA; 
  4. 模板DNA质量对合成的mRNA数量和质量非常重要,应为完全线性化、 RNase A-Free、高纯度,建议OD260/280为1.8~2.0。
  5. 可在反应体系中添加无机焦磷酸酶(终浓度为4U/ml),以增加mRNA产量。
  6. 随着保存时间的延长,如果酶活性明显下降,可能是由于反应缓冲液中DTT的分解。若观察到mRNA产量下降,可在反应体系中添加DTT至终浓度为10mM。


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