产品说明

• 二氧甲基转移酶是一种牛痘病毒来源的甲基转移酶，能够以S－腺苷甲硫氨酸（SAM）为甲基供体，在RNA 5'末端紧邻帽结构的第一个核苷酸的2'-O上添加一个甲基基团，把Cap 0甲基化为Cap 1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中mRNA的表达。 另外，此酶只能作用于带有7－甲基鸟苷帽结构（m7GpppN）的RNA，并不会作用于5'末端为pN、ppN、pppN或GpppN结构的RNA。
• 来源：二氧甲基转移酶纯化自携带二氧甲基转移酶表达载体的BL21大肠杆菌。

产品用途

以Cap0 mRNA为前体，制备具有Cap1结构的mRNA

产品包装

活性定义

在37℃、pH8.0的条件下， 1小时内使10 nmol的20个核苷酸20nt）带有7－甲基鸟苷帽结构（m7GpppN）的mRNA甲基化所需要的酶量定义为1个活性单位。

保存体系

• 50%甘油，20 mM Tris-HCl（25℃，pH 8.0）, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100。
• 保存温度：-20±5℃，或-80℃长期保存。

从Cap0 mRNA制备Cap1 mRNA，参考反应体系（20μl）

一步法生成Cap1 mRNA，参考反应体系（20μl）

37℃孵育1小时。(若RNA小于200nt，可以延长至3小时)

注意事项

1. 所用于实验的mRNA必须经过纯化并用无核酸酶水溶解，溶液中不能含EDTA和盐。
2. 建议在反应前热处理mRNA，以去除5'末端的二级结构，若5'端结构复杂，可将热处理时间延长至10 min。
3. 若已知mRNA 5'末端的结构复杂，可延长反应时间至3小时以提高加帽效率。5'末端二级结构简单的mRNA，可以不经过热处理直接进行加帽反应，反应时间和反应体系需要优化以获得最佳的加帽效率。
4. SAM稳定性较差，需要在反应开始之前现配现用。基于实验所需用量，在反应开始前将32mMSAM储备液稀释成2mM的工作液冰上保存备用。
5. 建议在反应体系中添加RNase抑制剂(终浓度为1U/μl)，防止RNase导致的mRNA降解。